Was ist ATP?
In allen lebenden Zellen, auch den Bakterien, finden wir ATP (Adenosintriphosphat). Je größer
die Menge an ATP in einer Probe ist, umso zahlreicher sind die lebenden Zellen.
Wird ATP mit einem Enzymsubstrat Luziferin / Luziferase vermischt, bewirkt es eine
Bioluminezenzreaktion, die theoretisch proportional zur Menge des ATP steht, das mit dem
Enzym in Kontakt kommt.
Theoretisch: je größer die Menge des ATP ist, umso stärker ist das mit einem Fotosens or
gemessene Licht und umso größer müsste die Anzahl der lebenden Bakterien sein.
Die klassische Atp Bestimmung, eine ganze andere Realität...
"Es wurden Werte gefunden, aber man konnte sie nicht mit etwas in Verbindung bringen.... " Kommentar des Anwenders.
FALSCHE POSITIVEN : das bakterielle ATP wird nicht vom Gesamt-ATP getrennt, der Anwender glaubt dass die Probe enthält viele Bakterien
- Bakterielle Zellen und nicht mikrobielle Zellen werden in einem Mini-Reagenzglas lysiert.
- Das freigesetzte ATP + das nicht mikrobielle ATP werden durch Biolumineszenz nachgewiesen. Das nicht mikrobielle ATP überlagert die Werte des bakteriellen ATP's.
- Es gibt keine Korrelation zwischen der sensitiven bakteriellen Gesamtflora und dem Gesamt-ATP.
EINZIGE LÖSUNG : Das freie und nicht mikrobielle ATP wird evakuiert, bevor die Analyse des bakteriellen ATP's durchgeführt wird.
FALSCHE NEGATIVEN: Hemmung der Biolumineszenz durch inhibierende Substanzen. Der Anwender glaubt
- Puffermittel, Biozide, Metallionen reduzieren das Signal der Biolumineszenz (Zerstörung des Enzyms Luziferase) Reduzierung von über 90 % des Signals in bestimmten Fällen (Vélasquez et al, 1997).
- Der Prozentsatz der Hemmung ist von einer Probe zur anderen nicht vorhersehbar.
EINZIGE LÖSUNG : Evakuieren der inhibierenden Substanzen + des freien und nicht mikrobiellen ATP's vor dem Extrahieren des bakteriellen ATP's.
GERINGE NACHWEISENPFINDLICHKEIT : geringes Volumen der durch Reinigung entnommenen TupferProbe:
- 0,1 ml: nicht repräsentatives Probevolumen der bakteriellen Population -> schwaches Signal
- Verdünnung des Atpextract nach Filtration nur 1% des gesamtes ATP wird analysiert
PROFILE-1 Technologie die Antwort aud diese schwer zu lösenden Problem
WELTPATENT: AUSWASCHSYSTEM FÜR INHIBIERENDE SUBSTANZEN + FREIES UND NICHT-MIKROBIELLES ATP VOR DER EXTRAHIERUNG UND BIOLUMINESZENZ DES BAKTERIELLEN ATP'S:
Die Hindernisse bei der Messung des ATP's wuden mittels PROFILE-1 des schnellene Bestimmungs-Kits für Bakterielles ATP beseitigt
Das PROFILE-1 Weltweit das einzige tragbare Schnellkit (< 5min) zur Bestimmung von bakteriellem ATP
- Korreliert mit den sensitivsten Nährböden im Trinkwasser
- Unterscheidung von Gesamt und pflanzlichem ATP und dem bakteriellen ATP
- Nicht sensitiv auf Substanzen, die im Umweltproben vorkommen und die Biolumineszenz hemmen.(Chlor, Sodium Thiosulfat, Salze und andere Biozide)
ARBEITSPRINZIP :
Durch Filtrieren werden die Bakterien auf dem Boden der FiltravetteTM konzentriert.
SRA wird hinzugefügt, wodurch die nicht mikrobiellen Zellen lysiert werden.
Nicht bakterielles ATP wird freigesetzt (siehe ETAPPE 1)
Die Substanzen mit inhibierender Wirkung werden mittels Luftdruck evakuiert und mit einem Filterpapier aufgesogen.
Die FiltravetteTM wird in ein Fach des Bioluminometers gestellt.
Die Bakterien werden mittels BRA lysiert und das bakterielle ATP wird in der
FiltravetteTM freigesetzt (siehe ETAPPE 3).
Luziferin/Luziferase wird hinzugefügt und vermischt (siehe ETAPPE 4).
Das Fach des PROFILE-1TM wird geschlossen. Das emittierte Licht entspricht der Menge der lebenden Bakterien und ist proportional zu deren Anzahl.
JE HÖHER DIE ANZAHL DER BAKTERIEN UMSO STÄRKER DIE BIOLUMINESZENZ!